Tecnica de tincion de Gram
TINCION DE GRAM
imagen tomada de:
La tinción
de Gram es uno de los métodos de tinción más importantes en el laboratorio
bacteriológico y con el que el estudiante debe estar perfectamente
familiarizado. Su utilidad práctica es indiscutible y en el trabajo
microscópico de rutina del Laboratorio de Microbiología las referencias a la
morfología celular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos, etc) se
basan justamente en la tinción de GRAM
Descripta en
forma breve, la secuencia de la tinción es la siguiente: el Frotis fijado con
calor se tiñe 1 min con Violeta Cristal, se lava con agua, se cubre con
solución Yodada durante 1 min y se lava de nuevo con agua, decolorar con mezcla
alcohol etílico/acetona. Escurrir y cubrir con Safranina (color de contraste)
durante 20 seg. Lavar y secar.
Esta tinción
se denominada así por el bacteriólogo danés Christian Gram, quien la desarrolló
en 1844. Sobre la base de su reacción a la tinción de Gram, las bacterias
pueden dividirse en dos grupos, grampositivas y gramnegativas (en este caso,
los términos positivo y negativo no tiene nada que ver con carga eléctrico,
sino simplemente designan dos grupos morfologicos distintos de bacterias). (microinmuno)
BACTERIAS
GRAM OSITIVAS Y NEGATIVAS
imagen tomada de :
Las
bacterias Gram negativas pierden un colorante (el cristal violeta) con mayor
facilidad que las Gram positivas. La razón es la menor cantidad de mucopéptido
de las paredes de las bacterias Gram negativas-esquema
Etanol La
diferenciación se hace añadiendo pequeñas cantidades de etanol a las células
teñidas con cristal violeta. El citoplasma de las células que han perdido el
cristal violeta se tiñen con otro colorante (safranina). La diferencia de color
se relaciona con el tipo de pared bacteriano: células de color violeta
(bacterias de pared Gram positivas) y células de color rosa (bacterias de pared
Gram negativa).
Diferencia
de color
En realidad
la diferencia de color no es específica de la pared bacteriana: todas las
células sin pared (como las animales) pierden fácilmente el cristal violeta (se
verán de color rosa). Todas las células con pared gruesa (como las de hongos)
se verán de color violeta. La correlación entre el color y el tipo de pared
solo tiene sentido con células bacterianas (salvo excepciones).
Cristal
violeta El cristal violeta es básico (se une a componentes celulares de carga
negativa). Atraviesa la envuelta celular y se acumula en el citoplasma. Para
facilitar la diferenciación se mezcla lugol con cristal violeta: el complejo
cristal-violeta-lugol precipita. Así el lugol dificulta la salida del cristal
violeta de ambos tipos de células, pero es más fácil de extraerlo de las Gram
negativas que de las Gram positivas
Decoloración
y safranina Cuando se añade etanol a una mezcla de células Gram positivas y
Gram negativas teñidas con cristal violeta, las células Gram positivas quedan
teñidas de violeta : no puede atravesar
la gruesa capa de mureína (pueden hacerlo si se prolonga excesivamente el
contacto con el alcohol). La pared de las bacterias Gram negativas debe su
rigidez a una capa de mureína mas delgada, a través de la cual el alcohol
extrae el cristal violeta de estas
células. Su citoplasma queda incoloro y puede teñirse de color rosa con el
colorante de contraste: la safranina
Estructura
de bacterias
En el curso que se indica se resumen y
esquematizan paredes bacterianas y la tinción de gram
- Factores que afectan el resultado de la tinción
La edad de las células, las condiciones de
cultivo y la actividad de sus autolisinas pueden afectar el resultado de la
tinción. Las células envejecidas, o crecidas en condiciones que impiden la
síntesis de mucopéptido pueden verse de color rojo. La intensidad de la
decoloración con alcohol suele ser el problema mas común (http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iii/pb-iii-3-gram.htm)
¿PARA QUE SIRVE?
Con la tinción de Gram lo que estamos detectando es
básicamente el tipo de pared celular de la bacteria que estamos analizando en
ese momento. Aunque esta técnica tiene ciertas limitaciones pues existen
bacterias que no presentan pared celular, como es el caso del género
Mycoplasma. Además, a veces, otros factores como la edad de la muestra o el
protocolo de la tinción pueden interferir en los resultados de la tinción, por
lo que siempre se recomienda usar controles y realizar pruebas más exhaustivas
en el caso de que se quiera identificar la bacteria. (Salom, 2017)
Bibliografía
http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iii/pb-iii-3-gram.htm.
(s.f.). http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iii/pb-iii-3-gram.htm. Recuperado el 21 de
MARZO de 2018, de http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iii/pb-iii-3-gram.htm:
http://www.ugr.es/~pomif/pom-bac/pb-iii/pb-iii-3-gram.htm
microinmuno. (s.f.). http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm.
Recuperado el 21 de marzo de 2018, de
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm:
http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm
Salom, E. V.
(septiembre de 2017). https://cienciatoday.com/tincion-de-gram/#.
Recuperado el 21 de marzo de 2018, de
https://cienciatoday.com/tincion-de-gram/#:
https://cienciatoday.com/tincion-de-gram/#
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